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良性复发性肝内胆汁淤积

w****w其他医务者

更新时间:2021-11-09 11:03

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病例摘要

【基本信息】男,25岁

【发病原因】病因不明

【临床诊断】1.慢加亚急性肝衰竭;2.胆囊炎。

【治疗方案】予复方甘草酸单胺S、还原型谷胱甘肽,多烯磷脂酰胆碱保肝降酶,前列地尔改善肝脏微循环等对症治疗

【治疗结果】未彻底治疗,患者要求出院

【病案重点】良性复发性肝内胆汁淤积

【病案介绍】

主诉

血液中白细胞总数达到11.6×109个/L,中性粒细胞高达87%,脑脊液呈混浊状态。2015年9月20日死亡。1.2标本患者的脑脊液和血液,37例**的咽拭子和血液。1.3主要试剂及仪器脑膜炎奈瑟菌凝集血清购自ThermoFisher公司;2×PremixExTaq和dH2O均购自Takara公司。APINH生化鉴定试纸条购自法国生物梅里埃公司;A群和C群流脑多糖抗体IgG检测试剂盒购自郑州亿特生物技术有限公司;革兰氏染色液购自BASO公司;血培养瓶、双抗和无抗巧克力平板,均购自郑州安图生物工程有限公司;离心机购自Eppendorf公司;CO2培养箱购自ThermoFisher公司;MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统购自Roche公司;荧光定量PCR仪和酶标仪均购自Bio-Rad公司;普通显微镜CX41购自奥林巴斯。1.4细菌培养及血清学鉴定①将患者脑脊液沉淀接种于无抗巧克力平板,37℃5%CO2进行培养,24h后进行镜检和生化鉴定。②将患者血培养瓶置于37℃5%CO2进行培养,15h后取培养液涂于无抗巧克力平板再进行培养,24h后进行鉴定。③将37例**的咽拭子接种于双抗巧克力平板,培养24h,挑取可疑菌落接种于无抗巧克力平板继续培养,48h挑取无抗巧克力平板上的菌落进行镜检和生化鉴定。对确定为脑膜炎奈瑟菌的标本,通过血清凝集试验进行分群。1.5基因分型。1.5.1DNA提取按照使用说明书,通过MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统对患者的脑脊液上清、血液和37例**的咽拭子进行DNA提取。1.5.2引物的合成引物和探针序列参照文献[7],由上海生工生物工程有限公司合成。1.5.3PCR扩增及产物鉴定使用脑膜炎奈瑟菌属ctrA基因对患者和**提取的DNA进行检测,再使用流脑分群引物对阳性标本进行分群。荧光定量PCR反应体系:PremixExTaq(2×)10μL,上下游引物、探针各1μL,DNA模板2μL,dH2O补足20μL体系。以分别含有ctrA基因、C群特异性基因和B群特异性基因的DNA为阳性对照,dH2O为阴性对照。PCR反应程序:95℃2min,95℃5s,60℃20s,共40个循环,在60℃收集荧光信号。Ct值≤35判定为阳性。1.5.4多位点序列分型引物的设计参照PubMLST网站上公布的脑膜炎奈瑟菌7个保守基因(abcZ、adk、aroE、fumC、gdh、pdhC、pgm)的引物信息(http://pubmlst.org/neisseria/***/primers.shtml)。PCR扩增之后进行测序,测序结果上传到PubMLST数据库进行分析[2]。1.6**的抗体水平按照试剂盒说明书,用A群和C群流脑多糖抗体IgGELISA检测试剂盒对37例**的血清进行流脑A群和C群抗体水平检测。标准曲线以标准品质量浓度值为x轴,以标准品A450nm值的对数值为y轴,通过四参数Logistic曲线拟合建立标准曲线,根据待测样品的A450nm值回算相应的质量浓度值。质量浓度≥2μg/mL则为阳性,具有免疫保护水平。1.7统计学分析采用IBMSPSS19.0软件对37例**流脑A群和C群抗体水平进行Fisher精确检验,P<0.05为差异有统计学意义。2.结果2.1细菌培养和鉴定镜检及生化鉴定结果显示,患者的脑脊液、血液和13号**的咽拭子标本均培养出脑膜炎奈瑟菌,其他36份**的标本均未见脑膜炎奈瑟菌生长。血清凝集试验结果显示,患者的脑脊髓液和血液均与C群血清凝集,13号**的咽拭子与B群血清出现凝集。2.2基因分型对于ctrA基因,患者脑脊液、血液和13号**扩增的Ct值分别为21、24和25;对于C群特异性基因,患者脑脊液和血液扩增的Ct值分别为24和26,13号**未扩增出曲线;对于B群特异性基因,13号**扩增的Ct值为28,患者脑脊液和血液均未扩增出曲线。这表明患者为C群脑膜炎奈瑟菌,13号**为B群脑膜炎奈瑟菌,与血清凝集试验结果一致。多位点序列分型结果显示,患者为ST4821型,13号**为ST5664型,两者均属于ST4821克隆群。2.3**的抗体水平A群流脑抗体阳性率较高,达91.89%,平均质量浓度为6.50μg/mL;C群流脑抗体水平阳性率相对较低,为21.62%,平均质量浓度为1.73μg/mL。A群抗体水平高于C群,差异具有统计学意义(P<0.01)。

现病史

血液中白细胞总数达到11.6×109个/L,中性粒细胞高达87%,脑脊液呈混浊状态。2015年9月20日死亡。1.2标本患者的脑脊液和血液,37例**的咽拭子和血液。1.3主要试剂及仪器脑膜炎奈瑟菌凝集血清购自ThermoFisher公司;2×PremixExTaq和dH2O均购自Takara公司。APINH生化鉴定试纸条购自法国生物梅里埃公司;A群和C群流脑多糖抗体IgG检测试剂盒购自郑州亿特生物技术有限公司;革兰氏染色液购自BASO公司;血培养瓶、双抗和无抗巧克力平板,均购自郑州安图生物工程有限公司;离心机购自Eppendorf公司;CO2培养箱购自ThermoFisher公司;MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统购自Roche公司;荧光定量PCR仪和酶标仪均购自Bio-Rad公司;普通显微镜CX41购自奥林巴斯。1.4细菌培养及血清学鉴定①将患者脑脊液沉淀接种于无抗巧克力平板,37℃5%CO2进行培养,24h后进行镜检和生化鉴定。②将患者血培养瓶置于37℃5%CO2进行培养,15h后取培养液涂于无抗巧克力平板再进行培养,24h后进行鉴定。③将37例**的咽拭子接种于双抗巧克力平板,培养24h,挑取可疑菌落接种于无抗巧克力平板继续培养,48h挑取无抗巧克力平板上的菌落进行镜检和生化鉴定。对确定为脑膜炎奈瑟菌的标本,通过血清凝集试验进行分群。1.5基因分型。1.5.1DNA提取按照使用说明书,通过MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统对患者的脑脊液上清、血液和37例**的咽拭子进行DNA提取。1.5.2引物的合成引物和探针序列参照文献[7],由上海生工生物工程有限公司合成。1.5.3PCR扩增及产物鉴定使用脑膜炎奈瑟菌属ctrA基因对患者和**提取的DNA进行检测,再使用流脑分群引物对阳性标本进行分群。荧光定量PCR反应体系:PremixExTaq(2×)10μL,上下游引物、探针各1μL,DNA模板2μL,dH2O补足20μL体系。以分别含有ctrA基因、C群特异性基因和B群特异性基因的DNA为阳性对照,dH2O为阴性对照。PCR反应程序:95℃2min,95℃5s,60℃20s,共40个循环,在60℃收集荧光信号。Ct值≤35判定为阳性。1.5.4多位点序列分型引物的设计参照PubMLST网站上公布的脑膜炎奈瑟菌7个保守基因(abcZ、adk、aroE、fumC、gdh、pdhC、pgm)的引物信息(http://pubmlst.org/neisseria/***/primers.shtml)。PCR扩增之后进行测序,测序结果上传到PubMLST数据库进行分析[2]。1.6**的抗体水平按照试剂盒说明书,用A群和C群流脑多糖抗体IgGELISA检测试剂盒对37例**的血清进行流脑A群和C群抗体水平检测。标准曲线以标准品质量浓度值为x轴,以标准品A450nm值的对数值为y轴,通过四参数Logistic曲线拟合建立标准曲线,根据待测样品的A450nm值回算相应的质量浓度值。质量浓度≥2μg/mL则为阳性,具有免疫保护水平。1.7统计学分析采用IBMSPSS19.0软件对37例**流脑A群和C群抗体水平进行Fisher精确检验,P<0.05为差异有统计学意义。2.结果2.1细菌培养和鉴定镜检及生化鉴定结果显示,患者的脑脊液、血液和13号**的咽拭子标本均培养出脑膜炎奈瑟菌,其他36份**的标本均未见脑膜炎奈瑟菌生长。血清凝集试验结果显示,患者的脑脊髓液和血液均与C群血清凝集,13号**的咽拭子与B群血清出现凝集。2.2基因分型对于ctrA基因,患者脑脊液、血液和13号**扩增的Ct值分别为21、24和25;对于C群特异性基因,患者脑脊液和血液扩增的Ct值分别为24和26,13号**未扩增出曲线;对于B群特异性基因,13号**扩增的Ct值为28,患者脑脊液和血液均未扩增出曲线。这表明患者为C群脑膜炎奈瑟菌,13号**为B群脑膜炎奈瑟菌,与血清凝集试验结果一致。多位点序列分型结果显示,患者为ST4821型,13号**为ST5664型,两者均属于ST4821克隆群。2.3**的抗体水平A群流脑抗体阳性率较高,达91.89%,平均质量浓度为6.50μg/mL;C群流脑抗体水平阳性率相对较低,为21.62%,平均质量浓度为1.73μg/mL。A群抗体水平高于C群,差异具有统计学意义(P<0.01)。

查体

血液中白细胞总数达到11.6×109个/L,中性粒细胞高达87%,脑脊液呈混浊状态。2015年9月20日死亡。1.2标本患者的脑脊液和血液,37例**的咽拭子和血液。1.3主要试剂及仪器脑膜炎奈瑟菌凝集血清购自ThermoFisher公司;2×PremixExTaq和dH2O均购自Takara公司。APINH生化鉴定试纸条购自法国生物梅里埃公司;A群和C群流脑多糖抗体IgG检测试剂盒购自郑州亿特生物技术有限公司;革兰氏染色液购自BASO公司;血培养瓶、双抗和无抗巧克力平板,均购自郑州安图生物工程有限公司;离心机购自Eppendorf公司;CO2培养箱购自ThermoFisher公司;MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统购自Roche公司;荧光定量PCR仪和酶标仪均购自Bio-Rad公司;普通显微镜CX41购自奥林巴斯。1.4细菌培养及血清学鉴定①将患者脑脊液沉淀接种于无抗巧克力平板,37℃5%CO2进行培养,24h后进行镜检和生化鉴定。②将患者血培养瓶置于37℃5%CO2进行培养,15h后取培养液涂于无抗巧克力平板再进行培养,24h后进行鉴定。③将37例**的咽拭子接种于双抗巧克力平板,培养24h,挑取可疑菌落接种于无抗巧克力平板继续培养,48h挑取无抗巧克力平板上的菌落进行镜检和生化鉴定。对确定为脑膜炎奈瑟菌的标本,通过血清凝集试验进行分群。1.5基因分型。1.5.1DNA提取按照使用说明书,通过MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统对患者的脑脊液上清、血液和37例**的咽拭子进行DNA提取。1.5.2引物的合成引物和探针序列参照文献[7],由上海生工生物工程有限公司合成。1.5.3PCR扩增及产物鉴定使用脑膜炎奈瑟菌属ctrA基因对患者和**提取的DNA进行检测,再使用流脑分群引物对阳性标本进行分群。荧光定量PCR反应体系:PremixExTaq(2×)10μL,上下游引物、探针各1μL,DNA模板2μL,dH2O补足20μL体系。以分别含有ctrA基因、C群特异性基因和B群特异性基因的DNA为阳性对照,dH2O为阴性对照。PCR反应程序:95℃2min,95℃5s,60℃20s,共40个循环,在60℃收集荧光信号。Ct值≤35判定为阳性。1.5.4多位点序列分型引物的设计参照PubMLST网站上公布的脑膜炎奈瑟菌7个保守基因(abcZ、adk、aroE、fumC、gdh、pdhC、pgm)的引物信息(http://pubmlst.org/neisseria/***/primers.shtml)。PCR扩增之后进行测序,测序结果上传到PubMLST数据库进行分析[2]。1.6**的抗体水平按照试剂盒说明书,用A群和C群流脑多糖抗体IgGELISA检测试剂盒对37例**的血清进行流脑A群和C群抗体水平检测。标准曲线以标准品质量浓度值为x轴,以标准品A450nm值的对数值为y轴,通过四参数Logistic曲线拟合建立标准曲线,根据待测样品的A450nm值回算相应的质量浓度值。质量浓度≥2μg/mL则为阳性,具有免疫保护水平。1.7统计学分析采用IBMSPSS19.0软件对37例**流脑A群和C群抗体水平进行Fisher精确检验,P<0.05为差异有统计学意义。2.结果2.1细菌培养和鉴定镜检及生化鉴定结果显示,患者的脑脊液、血液和13号**的咽拭子标本均培养出脑膜炎奈瑟菌,其他36份**的标本均未见脑膜炎奈瑟菌生长。血清凝集试验结果显示,患者的脑脊髓液和血液均与C群血清凝集,13号**的咽拭子与B群血清出现凝集。2.2基因分型对于ctrA基因,患者脑脊液、血液和13号**扩增的Ct值分别为21、24和25;对于C群特异性基因,患者脑脊液和血液扩增的Ct值分别为24和26,13号**未扩增出曲线;对于B群特异性基因,13号**扩增的Ct值为28,患者脑脊液和血液均未扩增出曲线。这表明患者为C群脑膜炎奈瑟菌,13号**为B群脑膜炎奈瑟菌,与血清凝集试验结果一致。多位点序列分型结果显示,患者为ST4821型,13号**为ST5664型,两者均属于ST4821克隆群。2.3**的抗体水平A群流脑抗体阳性率较高,达91.89%,平均质量浓度为6.50μg/mL;C群流脑抗体水平阳性率相对较低,为21.62%,平均质量浓度为1.73μg/mL。A群抗体水平高于C群,差异具有统计学意义(P<0.01)。

辅助检查

血液中白细胞总数达到11.6×109个/L,中性粒细胞高达87%,脑脊液呈混浊状态。2015年9月20日死亡。1.2标本患者的脑脊液和血液,37例**的咽拭子和血液。1.3主要试剂及仪器脑膜炎奈瑟菌凝集血清购自ThermoFisher公司;2×PremixExTaq和dH2O均购自Takara公司。APINH生化鉴定试纸条购自法国生物梅里埃公司;A群和C群流脑多糖抗体IgG检测试剂盒购自郑州亿特生物技术有限公司;革兰氏染色液购自BASO公司;血培养瓶、双抗和无抗巧克力平板,均购自郑州安图生物工程有限公司;离心机购自Eppendorf公司;CO2培养箱购自ThermoFisher公司;MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统购自Roche公司;荧光定量PCR仪和酶标仪均购自Bio-Rad公司;普通显微镜CX41购自奥林巴斯。1.4细菌培养及血清学鉴定①将患者脑脊液沉淀接种于无抗巧克力平板,37℃5%CO2进行培养,24h后进行镜检和生化鉴定。②将患者血培养瓶置于37℃5%CO2进行培养,15h后取培养液涂于无抗巧克力平板再进行培养,24h后进行鉴定。③将37例**的咽拭子接种于双抗巧克力平板,培养24h,挑取可疑菌落接种于无抗巧克力平板继续培养,48h挑取无抗巧克力平板上的菌落进行镜检和生化鉴定。对确定为脑膜炎奈瑟菌的标本,通过血清凝集试验进行分群。1.5基因分型。1.5.1DNA提取按照使用说明书,通过MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统对患者的脑脊液上清、血液和37例**的咽拭子进行DNA提取。1.5.2引物的合成引物和探针序列参照文献[7],由上海生工生物工程有限公司合成。1.5.3PCR扩增及产物鉴定使用脑膜炎奈瑟菌属ctrA基因对患者和**提取的DNA进行检测,再使用流脑分群引物对阳性标本进行分群。荧光定量PCR反应体系:PremixExTaq(2×)10μL,上下游引物、探针各1μL,DNA模板2μL,dH2O补足20μL体系。以分别含有ctrA基因、C群特异性基因和B群特异性基因的DNA为阳性对照,dH2O为阴性对照。PCR反应程序:95℃2min,95℃5s,60℃20s,共40个循环,在60℃收集荧光信号。Ct值≤35判定为阳性。1.5.4多位点序列分型引物的设计参照PubMLST网站上公布的脑膜炎奈瑟菌7个保守基因(abcZ、adk、aroE、fumC、gdh、pdhC、pgm)的引物信息(http://pubmlst.org/neisseria/***/primers.shtml)。PCR扩增之后进行测序,测序结果上传到PubMLST数据库进行分析[2]。1.6**的抗体水平按照试剂盒说明书,用A群和C群流脑多糖抗体IgGELISA检测试剂盒对37例**的血清进行流脑A群和C群抗体水平检测。标准曲线以标准品质量浓度值为x轴,以标准品A450nm值的对数值为y轴,通过四参数Logistic曲线拟合建立标准曲线,根据待测样品的A450nm值回算相应的质量浓度值。质量浓度≥2μg/mL则为阳性,具有免疫保护水平。1.7统计学分析采用IBMSPSS19.0软件对37例**流脑A群和C群抗体水平进行Fisher精确检验,P<0.05为差异有统计学意义。2.结果2.1细菌培养和鉴定镜检及生化鉴定结果显示,患者的脑脊液、血液和13号**的咽拭子标本均培养出脑膜炎奈瑟菌,其他36份**的标本均未见脑膜炎奈瑟菌生长。血清凝集试验结果显示,患者的脑脊髓液和血液均与C群血清凝集,13号**的咽拭子与B群血清出现凝集。2.2基因分型对于ctrA基因,患者脑脊液、血液和13号**扩增的Ct值分别为21、24和25;对于C群特异性基因,患者脑脊液和血液扩增的Ct值分别为24和26,13号**未扩增出曲线;对于B群特异性基因,13号**扩增的Ct值为28,患者脑脊液和血液均未扩增出曲线。这表明患者为C群脑膜炎奈瑟菌,13号**为B群脑膜炎奈瑟菌,与血清凝集试验结果一致。多位点序列分型结果显示,患者为ST4821型,13号**为ST5664型,两者均属于ST4821克隆群。2.3**的抗体水平A群流脑抗体阳性率较高,达91.89%,平均质量浓度为6.50μg/mL;C群流脑抗体水平阳性率相对较低,为21.62%,平均质量浓度为1.73μg/mL。A群抗体水平高于C群,差异具有统计学意义(P<0.01)。

【诊治过程】

初步诊断

血液中白细胞总数达到11.6×109个/L,中性粒细胞高达87%,脑脊液呈混浊状态。2015年9月20日死亡。1.2标本患者的脑脊液和血液,37例**的咽拭子和血液。1.3主要试剂及仪器脑膜炎奈瑟菌凝集血清购自ThermoFisher公司;2×PremixExTaq和dH2O均购自Takara公司。APINH生化鉴定试纸条购自法国生物梅里埃公司;A群和C群流脑多糖抗体IgG检测试剂盒购自郑州亿特生物技术有限公司;革兰氏染色液购自BASO公司;血培养瓶、双抗和无抗巧克力平板,均购自郑州安图生物工程有限公司;离心机购自Eppendorf公司;CO2培养箱购自ThermoFisher公司;MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统购自Roche公司;荧光定量PCR仪和酶标仪均购自Bio-Rad公司;普通显微镜CX41购自奥林巴斯。1.4细菌培养及血清学鉴定①将患者脑脊液沉淀接种于无抗巧克力平板,37℃5%CO2进行培养,24h后进行镜检和生化鉴定。②将患者血培养瓶置于37℃5%CO2进行培养,15h后取培养液涂于无抗巧克力平板再进行培养,24h后进行鉴定。③将37例**的咽拭子接种于双抗巧克力平板,培养24h,挑取可疑菌落接种于无抗巧克力平板继续培养,48h挑取无抗巧克力平板上的菌落进行镜检和生化鉴定。对确定为脑膜炎奈瑟菌的标本,通过血清凝集试验进行分群。1.5基因分型。1.5.1DNA提取按照使用说明书,通过MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统对患者的脑脊液上清、血液和37例**的咽拭子进行DNA提取。1.5.2引物的合成引物和探针序列参照文献[7],由上海生工生物工程有限公司合成。1.5.3PCR扩增及产物鉴定使用脑膜炎奈瑟菌属ctrA基因对患者和**提取的DNA进行检测,再使用流脑分群引物对阳性标本进行分群。荧光定量PCR反应体系:PremixExTaq(2×)10μL,上下游引物、探针各1μL,DNA模板2μL,dH2O补足20μL体系。以分别含有ctrA基因、C群特异性基因和B群特异性基因的DNA为阳性对照,dH2O为阴性对照。PCR反应程序:95℃2min,95℃5s,60℃20s,共40个循环,在60℃收集荧光信号。Ct值≤35判定为阳性。1.5.4多位点序列分型引物的设计参照PubMLST网站上公布的脑膜炎奈瑟菌7个保守基因(abcZ、adk、aroE、fumC、gdh、pdhC、pgm)的引物信息(http://pubmlst.org/neisseria/***/primers.shtml)。PCR扩增之后进行测序,测序结果上传到PubMLST数据库进行分析[2]。1.6**的抗体水平按照试剂盒说明书,用A群和C群流脑多糖抗体IgGELISA检测试剂盒对37例**的血清进行流脑A群和C群抗体水平检测。标准曲线以标准品质量浓度值为x轴,以标准品A450nm值的对数值为y轴,通过四参数Logistic曲线拟合建立标准曲线,根据待测样品的A450nm值回算相应的质量浓度值。质量浓度≥2μg/mL则为阳性,具有免疫保护水平。1.7统计学分析采用IBMSPSS19.0软件对37例**流脑A群和C群抗体水平进行Fisher精确检验,P<0.05为差异有统计学意义。2.结果2.1细菌培养和鉴定镜检及生化鉴定结果显示,患者的脑脊液、血液和13号**的咽拭子标本均培养出脑膜炎奈瑟菌,其他36份**的标本均未见脑膜炎奈瑟菌生长。血清凝集试验结果显示,患者的脑脊髓液和血液均与C群血清凝集,13号**的咽拭子与B群血清出现凝集。2.2基因分型对于ctrA基因,患者脑脊液、血液和13号**扩增的Ct值分别为21、24和25;对于C群特异性基因,患者脑脊液和血液扩增的Ct值分别为24和26,13号**未扩增出曲线;对于B群特异性基因,13号**扩增的Ct值为28,患者脑脊液和血液均未扩增出曲线。这表明患者为C群脑膜炎奈瑟菌,13号**为B群脑膜炎奈瑟菌,与血清凝集试验结果一致。多位点序列分型结果显示,患者为ST4821型,13号**为ST5664型,两者均属于ST4821克隆群。2.3**的抗体水平A群流脑抗体阳性率较高,达91.89%,平均质量浓度为6.50μg/mL;C群流脑抗体水平阳性率相对较低,为21.62%,平均质量浓度为1.73μg/mL。A群抗体水平高于C群,差异具有统计学意义(P<0.01)。

诊治经过

血液中白细胞总数达到11.6×109个/L,中性粒细胞高达87%,脑脊液呈混浊状态。2015年9月20日死亡。1.2标本患者的脑脊液和血液,37例**的咽拭子和血液。1.3主要试剂及仪器脑膜炎奈瑟菌凝集血清购自ThermoFisher公司;2×PremixExTaq和dH2O均购自Takara公司。APINH生化鉴定试纸条购自法国生物梅里埃公司;A群和C群流脑多糖抗体IgG检测试剂盒购自郑州亿特生物技术有限公司;革兰氏染色液购自BASO公司;血培养瓶、双抗和无抗巧克力平板,均购自郑州安图生物工程有限公司;离心机购自Eppendorf公司;CO2培养箱购自ThermoFisher公司;MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统购自Roche公司;荧光定量PCR仪和酶标仪均购自Bio-Rad公司;普通显微镜CX41购自奥林巴斯。1.4细菌培养及血清学鉴定①将患者脑脊液沉淀接种于无抗巧克力平板,37℃5%CO2进行培养,24h后进行镜检和生化鉴定。②将患者血培养瓶置于37℃5%CO2进行培养,15h后取培养液涂于无抗巧克力平板再进行培养,24h后进行鉴定。③将37例**的咽拭子接种于双抗巧克力平板,培养24h,挑取可疑菌落接种于无抗巧克力平板继续培养,48h挑取无抗巧克力平板上的菌落进行镜检和生化鉴定。对确定为脑膜炎奈瑟菌的标本,通过血清凝集试验进行分群。1.5基因分型。1.5.1DNA提取按照使用说明书,通过MagNAPureLC2.0全自动核酸分离纯化系统对患者的脑脊液上清、血液和37例**的咽拭子进行DNA提取。1.5.2引物的合成引物和探针序列参照文献[7],由上海生工生物工程有限公司合成。1.5.3PCR扩增及产物鉴定使用脑膜炎奈瑟菌属ctrA基因对患者和**提取的DNA进行检测,再使用流脑分群引物对阳性标本进行分群。荧光定量PCR反应体系:PremixExTaq(2×)10μL,上下游引物、探针各1μL,DNA模板2μL,dH2O补足20μL体系。以分别含有ctrA基因、C群特异性基因和B群特异性基因的DNA为阳性对照,dH2O为阴性对照。PCR反应程序:95℃2min,95℃5s,60℃20s,共40个循环,在60℃收集荧光信号。Ct值≤35判定为阳性。1.5.4多位点序列分型引物的设计参照PubMLST网站上公布的脑膜炎奈瑟菌7个保守基因(abcZ、adk、aroE、fumC、gdh、pdhC、pgm)的引物信息(http://pubmlst.org/neisseria/***/primers.shtml)。PCR扩增之后进行测序,测序结果上传到PubMLST数据库进行分析[2]。1.6**的抗体水平按照试剂盒说明书,用A群和C群流脑多糖抗体IgGELISA检测试剂盒对37例**的血清进行流脑A群和C群抗体水平检测。标准曲线以标准品质量浓度值为x轴,以标准品A450nm值的对数值为y轴,通过四参数Logistic曲线拟合建立标准曲线,根据待测样品的A450nm值回算相应的质量浓度值。质量浓度≥2μg/mL则为阳性,具有免疫保护水平。1.7统计学分析采用IBMSPSS19.0软件对37例**流脑A群和C群抗体水平进行Fisher精确检验,P<0.05为差异有统计学意义。2.结果2.1细菌培养和鉴定镜检及生化鉴定结果显示,患者的脑脊液、血液和13号**的咽拭子标本均培养出脑膜炎奈瑟菌,其他36份**的标本均未见脑膜炎奈瑟菌生长。血清凝集试验结果显示,患者的脑脊髓液和血液均与C群血清凝集,13号**的咽拭子与B群血清出现凝集。2.2基因分型对于ctrA基因,患者脑脊液、血液和13号**扩增的Ct值分别为21、24和25;对于C群特异性基因,患者脑脊液和血液扩增的Ct值分别为24和26,13号**未扩增出曲线;对于B群特异性基因,13号**扩增的Ct值为28,患者脑脊液和血液均未扩增出曲线。这表明患者为C群脑膜炎奈瑟菌,13号**为B群脑膜炎奈瑟菌,与血清凝集试验结果一致。多位点序列分型结果显示,患者为ST4821型,13号**为ST5664型,两者均属于ST4821克隆群。2.3**的抗体水平A群流脑抗体阳性率较高,达91.89%,平均质量浓度为6.50μg/mL;C群流脑抗体水平阳性率相对较低,为21.62%,平均质量浓度为1.73μg/mL。A群抗体水平高于C群,差异具有统计学意义(P<0.01)。

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